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A 型肉毒毒素治疗雷诺现象的机制研究

 

Authors Zhou Y, Liu Y, Hao Y, Feng Y, Pan L, Liu W, Li B, Xiao L, Jin L, Nie Z

Received 29 December 2017

Accepted for publication 10 April 2018

Published 26 June 2018 Volume 2018:12 Pages 1905—1915

DOI https://doi.org/10.2147/DDDT.S161113

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Editor who approved publication: Dr Qiongyu Guo

背景:A 型肉毒毒素(BoNT/A)已经成为治疗雷诺现象(RP)的有效手段。然而,BoNT/A 在拮抗 RP 患者小动脉收缩中的机制尚不清楚。
材料与方法:采用大鼠提睾肌模型,在 BoNT/A,哌唑嗪(选择性突触后 α1-肾上腺素能受体阻滞剂),育亨宾(选择性突触前 α2-肾上腺素能受体阻滞剂)和 BQ-123(内皮素A受体拮抗剂)的干预下检测小动脉直径的收缩情况以及不同剂量 BoNT/A 作用下小动脉收缩率的变化,同时通过免疫荧光检测肾上腺素能受体的分布。通过原代培养大鼠颈上神经节交感神经元模型(SCGNs),对囊泡进行 FM1-43 染色后观察并分析 BoNT/A 对囊泡循环的影响。采用 ELISA 检测不同剂量 BoNT/A 干预 SCGNs 后去甲肾上腺素(NE)的分泌水平。此外,运用 Western 印迹技术检测 SNAP-25 蛋白质水平变化,并通过免疫荧光分析相关受体表达情况。
结果:实验结果显示,随着 BoNT/A 剂量的增加,对小动脉收缩的抑制作用增加。在同一参数的电刺激下,BoNT/A,哌唑嗪,BQ-123 可以明显抑制电刺激所诱发的小动脉收缩,而且哌唑嗪与 BoNT/A 具有等同的抑制作用,BQ-123 与 BoNT/A 存在协同作用。当使用 BoNT/A 干预 SCGNs30 分钟,我们发现 FM1-43 的荧光强度减弱程度与 BoNT/A 的剂量相关。在 BoNT/A(25μ/mL)处理后 24 小时,ELISA 检测培养基上清液中 NE 释放显著降低。在 BoNT/A(50μ/mL)处理 24 小时后,通过 Western 印迹技术可检测到裂解的 SNAP-25 片段。而且与乙酰胆碱能神经元类似,在交感神经元上可以检测到 SV2C,GM1 和 FRFR3 的受体。
结论:BoNT/A 可以通过交感神经途径显著抑制电刺激诱导的小动脉收缩。该机制类似于胆碱能通路,通过裂解 SNAP-25 抑制交感神经元的囊泡释放,最终阻断囊泡与突触前膜融合,从而抑制 NE 的释放。
关键词:A 型肉毒毒素,雷诺现象,α-肾上腺素受体,小动脉直径收缩率,SNAP-25,SV2C,GM1,FGFR3,交感神经元,囊泡循环




Figure 5 Identification of primary sympathetic neurons by immunofluorescence.