目的：N-甲基-d-天冬氨酸（NMDA）受体 NR1 亚基的异常表达可能会增加对神经精神疾病的敏感性。本研究的目的是研究位于编码人类 GluN1 受体的 GRIN1 基因上的 3’UTR 功能序列，以确定其对 GluN1 受体表达的影响。
方法：我们将含有 GRIN1 基因 3'UTR 截短片段的 7 个重组 pmirGLO 重组载体转染到 HEK-293，SK-N-SH 和 U87 细胞系中，比较相邻长度片段的相对荧光强度。TargetScan 数据库用于预测作用于差异表达片段的潜在 miRNA。然后，将预测的 miRNA 模拟体/抑制体与 GRIN1 的完整 3'UTR（pmirGLO-GRIN1）共转染到这三个细胞系中，以研究它们对 GRIN1 基因表达的影响。
结果：与 pmirGLo-Basic 载体相比，完整的 GRIN1 基因 3'UTR 重组序列（-27bp -- +1284bp，终止密码子的下一个碱基为+1）的相对荧光强度在三个细胞系中均显着下降。在片段 -27bp -- +294bp 和片段 -27bp -- +497bp 之间，以及片段 -27bp -- +708bp 和片段 -27bp -- +907bp 之间，相对荧光强度均具有显著差异。根据 TargetScan 数据库的预测与我们的分析，miR-212-5p，miR-324-3p 和 miR-326 可以结合到片段 +295bp -- +497bp，而 miR-491-5p 可以与片段 +798bp -- +907bp 结合。将 miRNA 模拟体/抑制体或模拟体/抑制体 NC 与 GRIN1 基因完整的 3'UTR 重组载体共转染后，我们发现 has-miR-491-5p 在三个细胞系中均可以显着抑制 GRIN1 基因的表达，而 has-miR-326 抑制体上调了 GRIN1 基因在 HEK-293 和 U87 细胞中的表达。
结论：miR-491-5p 可能与 GRIN1 基因的 3'UTR 结合（+799bp -- +805bp，以终止密码子的下一个碱基为 1）并下调 HEK-293，SK-N-SH 和 U87 细胞系中 GRIN1 基因的表达，这提示了 miR-491-5p 在中枢神经系统疾病中的潜在作用。
关键字：人类 GRIN1  基因，3'UTR，miRNA，GluN1 受体，帕金森氏病