目的：脓毒症肠损伤在脓毒症患者中有较高的发病率和死亡率，至今尚无有效的治疗方法。先前我们的研究团队已经证明了 2% 浓度的氢气（H₂）吸入能够有效改善脓毒症相关的器官损伤，但其作用的具体分子机制尚不清楚。本研究主要通过 iTRAQ 定量蛋白质组学技术，研究 H₂ 对脓毒症肠损伤的影响。
方法：使用雄性 C57BL/6J 小鼠，采用盲肠结扎穿刺法（CLP）制备脓毒症模型。测定小鼠 7 天存活率，测定血液和腹腔灌洗液中的细菌负荷，利用苏木精-伊红染色（HE）对肠组织进行病理观察，利用 4kd-异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC-Dextran）测定血药浓度，结合免疫印迹法测定肠屏障紧密连接蛋白的表达，表明 H₂ 治疗对脓毒症肠损伤的影响。随后采用基于 iTRAQ 的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术，对 H₂ 治疗脓毒症肠损伤的蛋白质组学进行定量，通过生物信息学技术对定向信息进行 GO 功能注释富集、KEGG 功能注释富集和构建分子蛋白网络。最后利用免疫印迹法对蛋白质组学筛选出的差异蛋白进行验证。
结果：2% 浓度的 H₂ 吸入可显著提高脓毒症小鼠的 7 天存活率，降低血液和腹腔灌洗细菌负荷，减轻肠道病理损伤，降低肠屏障通透性，增加肠屏障紧密连接蛋白的表达。通过质谱技术共鉴定到 4194 个蛋白，其中 199 个差异表达蛋白与 H₂ 治疗脓毒症的积极作用有关。生物信息学功能注释分析富集到甲状腺激素合成、氮代谢等信号途径。免疫印迹蛋白验证结果显示，H₂ 吸入下调了脓毒症小鼠肠组织中 DMBT1、IRS2、NDRG1 和 SAA1 蛋白的表达。
结论：2% H₂ 吸入能够有效缓解脓毒症引起的肠损伤。在蛋白质组学鉴定到的 4194 个蛋白中，有 199 种差异蛋白与 H₂ 在脓毒症肠损伤中的保护作用有关。生物信息学富集分析中，H₂ 相关的差异蛋白在甲状腺激素合成、氮代谢、消化吸收（维生素、蛋白质和脂肪）信号通路中被显著富集。H₂ 可以通过下调 DMBT1、IRS2、NDRG1 和 SAA1 的表达，减轻脓毒症小鼠肠损伤。
关键词：脓毒症；肠损伤；氢气；蛋白质组学；iTRAQ