背景：检测单碱基突变对实时监测肿瘤进展、治疗效果和耐药性具有重要意义。然而，常规的 PCR 技术难以从大量的野生型序列背景中特异性地检测单碱基突变。为了提高检测特异性，我们开发了基于 Taqman-MGB 探针的纳米粒子辅助 PCR 用于高特异性的单碱基突变检测。
方法和结果：以表皮生长因子受体碱基序列中第 2369 位的突变（EGFR T790M）作为研究模型，加入 AuNPs 来抑制野生型序列扩增，进而提高扩增的特异性。研究结果表明在该检测体系中，50 nM 的 AuNPs 可以显著提高扩增特异性，且其可以在 10^-9μM 到 10μM 的模板浓度范围内提高特异性，能在加标样品中检测到低至 0.95% 的突变丰度。为了理解其中机理，我们提出了一个 “能量屏障” 假说，并在实验中得到了验证。
结论：基于 Taqman-MGB 探针的纳米粒子辅助 PCR 能显著提高 T790M 点突变的检测特异性，与现有的 qPCR 方法相比，该方法有望成为诊断各种已知突变基因相关疾病的有力工具。
关键词：单碱基突变，金纳米粒子，特异性, 能量屏障，突变丰度