摘要

目的：探讨达格列净通过调控Caspase-3/GSDME信号通路对高糖状态肾小管上皮细胞焦亡的作用及机制研究，为临床糖尿病肾病治疗提供实验依据。

方法：体外培养人肾小管上皮细胞（human proximaltubular epithelial cell, HK-2），分为对照组，葡萄糖组，达格列净组（30mmol/L葡萄糖＋2.5µmol/L达格列净），单抑制剂组（30mmol/L葡萄糖＋20µmol/L Caspase-1抑制剂HY-P1009），双抑制剂组（30mmol/L葡萄糖＋20µmol/L Caspase-1抑制剂+ 50µmol/L Caspase-3抑制剂HY-12466），SiRNA转染组（敲低SGLT2-SiRNA），各组均干预48h。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力并确定干预的葡萄糖浓度和达格列净浓度；采用Western Blot法检测Caspase-1、Caspase-3、GSDMD、GSDME、GSDME-N、Caspase-8、NF-κB等相关蛋白表达。用流式细胞术检测各组细胞焦亡情况。

结果：与对照组相比，葡萄糖组细胞活力降低，细胞焦亡率和Caspase-1、Caspase-3、GSDMD、GSDME、GSDME-N、Caspase-8、NF-κB等相关蛋白水平均升高（P<0.05）。与葡萄糖组相比，达格列净组和双抑制剂组细胞焦亡率和Caspase-1、Caspase-3、GSDMD、GSDME、GSDME-N等相关蛋白水平均降低（P<0.05）。与转染对照组相比，靶向SGLT2敲除的转染组细胞焦亡率和Caspase-1、Caspase-3、GSDMD、GSDME、GSDME-N等相关蛋白水平则进一步降低（P<0.05）。

结论：在高糖状态下近端小管细胞中，达格列净可抑制高糖诱导的人HK-2的焦亡，其作用机制可能与抑制Caspase3/GSDME通路信号转导相关。

关键词：糖尿病肾病；肾小管上皮细胞；达格列净；细胞焦亡