李冬雪^{1,2, 3†}，唐丽^1†，房心宇^1†，柳婷婷^1†，罗茜¹，李佳欣¹，王菁¹，李岩伟¹，袁兵¹，王景林¹，高姗¹，康琳¹，赵宝华^2*，辛文文^1* 

1. 军事医学研究院，病原微生物生物安全全国重点实验室，北京，100071

2. 河北师范大学，生命科学学院，河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室，石家庄，050010

3. 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，传染病智能预警与追踪全国重点实验室，北京，102206

^†李冬雪，唐丽，房心宇和柳婷婷对本文贡献相同

^*通讯作者：赵宝华（zhaobaohua@hebtu.edu.cn）；辛文文（xinww@hotmail.com） 

摘要

引言：产气荚膜梭菌ε毒素（ETX）作为B类生物战剂，可导致家畜致死性肠毒血症。接种疫苗是预防ETX中毒的有效手段。

方法：本研究制备了一种细胞膜包裹的MNP-ASP-ETX纳米颗粒疫苗，其表面吸附具有B细胞靶向功能的ASP-ETX（Ov-ASP-1与ETX毒素融合蛋白），核心负载ETX^Y196E突变蛋白。通过体外细胞实验与动物模型，系统评估该疫苗的抗原递呈效率、生物安全性及免疫保护效果。

结果：ETX纳米颗粒疫苗在体内和体外均表现出良好的生物安全性和理想的包封效率，且其粒径易于被抗原呈递细胞摄取。与传统的铝佐剂疫苗相比（ETX^Y196E+Al），ETX纳米颗粒疫苗表现出更强的淋巴结引流能力，并且可以更稳定的释放抗原。MNP-ASP-ETX纳米颗粒疫苗能够诱导机体产生与ETX^Y196E+Al组相当水平的抗体滴度，并可同时诱导Th1和Th2型免疫应答。然而其保护效果略低于ETX^Y196E+Al。对此，我们进一步分析了小鼠脾脏中免疫细胞的增殖情况，结果显示MNP-ASP-ETX免疫组小鼠的B细胞水平增加，表明ASP-ETX促进了ETX纳米颗粒靶向B细胞，但可能由于ASP-ETX的吸附较少，导致这种效果并不显著。值得注意的是，免疫后两个月抗体水平与保护效果显著提升，其增长幅度超过ETX^Y196E + Al组，表明ETX纳米颗粒疫苗具有较强的长期保护潜力。

讨论：本研究表明MNP-ASP-ETX纳米颗粒疫苗可作为预防ETX中毒的新型疫苗候选，为毒素类疫苗的理性设计与开发提供创新策略。