摘要：肿瘤坏死因子-α 可以通过激活 NF-κB 介导血管内皮生长因子 C（VEGF-C）表达，从而促进胆囊癌微淋巴管生成。受体相互作用蛋白 1（RIP1）是 TNF-α 信号通路中调控细胞存亡的一个重要因子，且在胆囊癌组织中呈高表达。然而，RIP1 是否参与 TNF-α 信号通路诱导 VEGF-C 的表达进而促进胆囊癌微淋巴管的生成仍未知。在本次研究中：1、TNF-α 可以促进 NOZ 和 GBC-SD 胆囊癌细胞株 RIP1 mRNA 和蛋白的表达，并呈浓度和时间的依赖性。2、我们构建了慢病毒 RIP1-shRNA 和 PcDNA3.1-RIP1 重组质粒，通过 Western blot 检测 IκBα、p-IκBα、TAK1、NEMO 蛋白的表达情况；用 qRT-PCR  检测 VEGF-C mRNA 水平，用 ELISA 和 Western blot 试验检测 VEGF-C 蛋白水平；用双荧光素酶报告法定量检测 VEGF-C 启动子和 NF-κB 活性；用染色质免疫沉淀试验（ChIP）分析 NF-κB 与 VEGF-C 启动子的关系，于此来验证 RIP1 在 TNF-α-VEGF-C 信号通路中的作用。我们的发现证实了 RIP1 是 TNF-α 激活 NF-κB 活性的必需因子，RIP1 通过 NF-κB 通路调控 TNF-α 诱导的 VEGF-C 转录和蛋白水平的表达。3、我们用三维共培养法（胆囊癌细胞+淋巴内皮细胞）和原位移植裸鼠模型的体内外实验来评估 RIP1 对 TNF-α 诱导的胆囊癌微淋巴管形成和淋巴转移的影响。我们的研究证实了 RIP1 可以在体内外调控 TNF-α 诱导的胆囊癌淋巴管生成和淋巴转移。4、我们用免疫组化方法检测人胆囊癌组织标本中 RIP1、TNF-α 和淋巴管的表达情况，分析了 RIP1 蛋白与 TNF-α 蛋白以及淋巴管密度的相关性，结果表明  RIP1 的表达与 TNF-α 的表达以及 LVD 呈正相关。综上所述，我们认为 RIP1 可以通过 NF-κB 信号通路调控 TNF-α 诱导的胆囊癌 VEGF-C 的表达，从而影响了胆囊癌微淋巴管生成和淋巴转移。
Keywords: gallbladder cancer, RIP1, TNF-α, NF-κB, VEGF-C, lymphangiogenesis