目的：抗体是免疫分析技术的关键试剂，因此我们试图通过细胞因子作为分子佐剂辅助免疫制备高亲和力的人和肽素（CPP）单克隆抗体，并且进一步构建高灵敏的 CPP 化学发光 POCT 免疫分析方法。
方法：首先，我们使用酪氨酸激酶受体 3 配体（Flt3L），CC 亚型趋化因子 20（CCL20）和粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）作为分子佐剂辅助传统皮下免疫制备高亲和力单克隆抗体，并进一步开发用于 CPP 的高效免疫测定方法。
结果：这种免疫策略显着增强了小鼠对 CPP 的免疫应答。成功筛选到了 6 株具有高亲和力的抗 CPP 单克隆抗体并进一步筛选后用于全自动磁微粒化学发光免疫测定法的构建。构建的方法可快速有效地测定 1.2-1250 pmol L^-1 范围内的 CPP，且其检出限为 6.25 pmol L^-1。值得一提的是，整个分析的孵化过程可在 30 分钟内完成，与对照 ELISA 试剂盒（4.5 小时）相比，大大缩短了检测时间。此外，该分析方法具有高灵敏度和特异性，及较低的批内和批间差（CVs <15%）。最终，将此分析方法应用于 115 个随机血清样本的 CPP 检测，结果与作为对照的商品 ELISA 试剂盒数据高度相关（R²=0.9737）。
结论：所构建的检测方法可用于血清中 CPP 的即时检测，本研究中开发的方法也可以用于探索、开发其他疾病生物标志物的分析方法。
关键词：和肽素，细胞因子辅助免疫，高亲和力抗体，化学发光免疫分析，即时检验，临床应用