目的：吡嗪酰胺（Pyrazinamide, PZA）是多个现代结核病治疗方案的基石。本研究旨在研究 pncA +上下游区、rpsA、panD、Rv2783c 和 clpC1 基因的基因型检测结果与 PZA 表型耐药之间的关系，为进一步利用分子诊断结核分枝杆菌（Mtb）对 PZA 耐药性提供依据。
方法：对 448 例 Mtb 临床分离株进行表型药敏检测，对包括 pncA 整个操纵子在内的 PZA 耐药相关基因（Rv2044c-pncA-Rv2042c）进行测序分析，并进行吡嗪酰胺酶（PZase）活性测试。
结果：在 448 个 Mtb 临床分离株中，有 113 例是耐多药（MDR），195 例是前广泛耐药（pre-XDR）和 70 例是广泛耐药（XDR），而其余 70 株具有其他耐药性组合。共有 60.04%（269/448）的 Mtb 临床分离株对 PZA 有抗药性，其中 78/113 是 MDR，119/195 是 pre-XDR 和 29/70  是 XDR Mtb。PZAR 分离株具有北京基因型的优势（83.3%）。 Rv2044c-pncA-Rv2042c 的基因型表征揭示了在 Rv2044c 中新的非同义突变，其不具有 PZase 活性并赋予菌株对 PZA 耐药的特性。与表型药敏检测的数据相比，在 pncA+上游区域发生突变的 84.38%（227/269）PZAR 菌株显示出 83.64% 的敏感性，但综合在 rpsA 2.60%（7/269），panD 1.48%（4/269），Rv2783c 1.11%（3/269）和 Rv2044c 0.74%（2/269）上的突变后灵敏度则提高到 89.59%。本研究确定了 57 个新的突变。有趣的是，pncAwt 上游侧翼区的缺失（C-114del）使 A-11G 突变的影响无效，使菌株有 PZase 活性，这与五个 PZase 无活性的 A-11G PZAR 突变体不同。26 株具有野生型 pncA 基因（表现为 PZase 有活性或无活性）但无已知耐药突变位点的 PZAR 菌株表明存在未知的耐药机制。
结论：我们研究表明，华南地区 MDR 和 pre-XDR Mtb 中的 PZAR 比例明显比其他地区高。同时对 pncA+上游侧翼区，rpsA，panD，Rv2783c 和 Rv2044c 检测可提供更可靠的 PZA 基因型药敏检测结果。发现的 57 个新突变/基因可能成为诊断标记并发挥重要作用。pncA 的上游侧翼区和 PZase 调控的对于探索未知的 PZA 耐药机制具有重要价值。
Keywords: tuberculosis, pyrazinamidase, drug resistance, molecular diagnosis, novel mutations, frameshift deletion