吴嗣泽^*，王成芳

海南医科大学第一附属医院超声科，海南省海口市570102

通讯作者：吴嗣泽，Email: wsz074@aliyun.com

摘要：目的：探索用多焦点超声辐射力脉冲（简称MF-ARFI）作用于小鼠异种移植肝肿瘤是否能够调制肿瘤间质状态和增强的通透性和滞留效应，从而促进纳米级药物多柔比星脂质体向瘤体深部递送，以增加多柔比星抗肿瘤效果和降低副作用。材料与方法：将多柔比星装载于用聚乙二醇2000修饰的脂质材料合成的脂质体得到多柔比星脂质体（简称DOX@Lip），对DOX@Lip进行表征。用水凝胶和胶原蛋白等材料制备仿实体瘤基质模型。用Huh-7细胞注射于小鼠皮下组织构建小鼠异种移植肝细胞癌模型。用MF-ARFI分别辐照人类肝细胞癌细胞Huh-7细胞、Huh-7细胞 + DOX@Lip，观察MF-ARFI对肝细胞癌细胞的影响。用MF-ARFI分别辐照放置有DOX@Lip的仿肿瘤基质和放置有DOX@Lip的生理盐水以观察MF-ARFI辐照载DOX@Lip的物质中的DOX@Lip是否发生位移。通过荷瘤小鼠尾静脉注射DOX@Lip以观察DOX@Lip和DOX@Lip + MF-ARFI的抗肿瘤效果和评估DOX@Lip的副作用。自第二次注射DOX@Lip前开始，先用MF-ARFI辐照荷瘤小鼠瘤体，之后再注射DOX@Lip；之后采用同样的方案。监测小鼠整体状况、体重和瘤体体积变化。动物实验终末评估包括肿瘤和主要器官的组织病理学（H&E）、凋亡（TUNEL）和分子谱分析（通过蛋白印迹法检测BAX和BCL-2，计算其与β-actin 的比值，分析BAX和BCL-2比值）。结果：比较经MF-ARFI辐照和无MF-ARFI辐照的Huh7细胞中的活细胞与死亡细胞染色结果，差异无显著性。比较经DOX@Lip和DOX@Lip + MF-ARFI处理的Huh7细胞的凋亡率，差异无显著性。用常规诊断用超声分别辐照放置有DOX@Lip的仿肿瘤基质和放置有DOX@Lip的生理盐水的容器底部，位于仿肿瘤基质和生理盐水中的DOX@Lip未见位移发生。用MF-ARFI分别辐照放置有DOX@Lip的仿肿瘤基质和放置有DOX@Lip的生理盐水的容器底部，位于仿肿瘤基质和生理盐水中的DOX@Lip都发生了位移。比较荷瘤小鼠在DOX、DOX+ MF-ARFI、DOX@Lip、DOX@Lip + MF-ARFI处理后的小鼠体重变化和瘤体大小变化，发现经DOX 和DOX + MF-ARFI处理后的小鼠体重显著减轻，经DOX@Lip和DOX@Lip + MF-ARFI处理后的小鼠体重无显著减轻；经DOX、DOX+ MF-ARFI处理后的小鼠瘤体大小变化较小，二者差异不明显；经DOX@Lip和DOX@Lip + MF-ARFI处理后的，小鼠瘤体大小变化较大，二者差异显著。心脏组织病理学分析显示，经DOX@Lip和DOX@Lip + MF-ARFI处理的小鼠的心肌毒性与用磷酸盐缓冲溶液处理的对照组小鼠的心肌毒性比较，差异均无显著性。TUNEL染色结果显示，经DOX、DOX+ MF-ARFI处理后的瘤体组织细胞凋亡显著，二者差异无显著性；用DOX@Lip + MF-ARFI处理的瘤体组织细胞凋亡比DOX@Lip更显著，二者差异有显著性。分子实验分析表明，与单独应用DOX@Lip相比，经DOX@Lip + MF-ARFI处理的鼠的移植瘤的BCL-2的表达显著降低，BAX的表达无明显变化，BCL-2/BAX比值显著增大。结论：在用DOX@Lip治疗小鼠异种移植肝肿瘤时，静脉给药前用MF-ARFI对移植瘤进行辐照，可促进DOX@Lip向瘤体深部递送，显著增加抗肿瘤效果，同时减少副作用，尤其是能够使DOX对心肌的毒性减低。本研究提示，在用纳米级脂质体药物治疗实体瘤前，用MF-ARFI对瘤体进行辐照，能够促进药物向瘤体深部递送和优化治疗效果。这种策略具有潜在的转化价值。