摘要

目的：替加环素被认为是一种用于治疗多重耐药鲍曼不动杆菌的重要抗生素，然而越来越多的替加环素耐药鲍曼不动杆菌的分离给全球公共卫生事业带来巨大挑战。本研究旨在分析患者感染的鲍曼不动杆菌在抗菌药物治疗过程中对替加环素敏感性降低的机制，从更贴近临床实际的角度揭示医院感染常见的多重耐药鲍曼不动杆菌的替加环素耐药性发展。

方法：动态追踪三名患者感染的多重耐药鲍曼不动杆菌，观察其在抗菌药物治疗过程中对替加环素的敏感性变化。分别收集每名患者替加环素敏感鲍曼不动杆菌和替加环素耐药鲍曼不动杆菌，并配对为一组。对来自于这三名患者的6株鲍曼不动杆菌采用分子分型及系统发育分析确定同一组内替加环素敏感性不同的两株鲍曼不动杆菌的同源性。采用全基因组测序和比较基因组学分析探究组内两株菌的单核苷酸多态性与小片段的插入或缺失序列，找到突变基因。通过基因敲除实验验证筛选到的可能影响鲍曼不动杆菌替加环素敏感性的基因在替加环素耐药进化中的作用。

结果: 分子分型与系统发育分析均支持来自同一患者的替加环素耐药鲍曼不动杆菌是由最初感染的替加环素敏感鲍曼不动杆菌进化而来。三名患者感染的鲍曼不动杆菌在进展为替加环素耐药菌株之前都使用过替加环素治疗。并且，其中一名患者的鲍曼不动杆菌在停用替加环素21天后才进展为替加环素耐药菌株。组内比较基因组学分析表明三组菌中均发生了三聚体自转运粘附素保守结构域的点突变，在两个组中发现了AcrR的移码突变。通过构建AcrR基因敲除株探究其在替加环素耐药进展中的作用，结果显示在本研究中AcrR基因似乎对替加环素耐药性与生物膜形成能力并无显著影响。

结论：替加环素的使用会促进鲍曼不动杆菌产生对替加环素的耐药，并且这种耐药性进化可能并不全是发生在替加环素使用期间。ata基因、AdeS基因及AcrR基因突变可能在促进鲍曼不动杆菌产生对替加环素耐药性的过程中发挥某种作用。尽管本研究中，基因敲除实验显示AcrR基因并未对鲍曼不动杆菌替加环素耐药性及生物膜形成能力造成直接影响，但相较于体外诱导的耐药菌株而言，临床分离菌株受到复杂环境多因素的影响，AcrR基因的作用仍需要进一步研究。

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