目的：骨髓间充质干细胞（BMSCs）具有多分化潜能，已成为骨组织工程研究的种子细胞。我们前期研究发现一氧化碳释放分子-3（CORM-3）能够促进大鼠 BMSCs 成骨分化，然而其机制尚不明确。本实验中我们围绕 miR-195-5p 进行相关机制研究。
方法：以 miR-195-5p mimics、miR-195-5p inhibitor、Wnt3a 过表达载体及 Wnt3a siRNA 分别瞬时转染大鼠 BMSCs。采用 RT-qPCR 法和 Western blotting 法分别检测细胞成骨相关因子 Runx2 与 OPN 的 mRNA 与蛋白的表达，采用茜素红染色法检测矿化能力。采用双荧光素酶报告实验验证 miR-195-5p 与 Wnt3a 的靶向关系。
结果：在 CORM-3 诱导的大鼠 BMSCs 成骨分化过程中，miR-195-5p 的表达显著下降，差异有统计学意义（P < 0.05）。以 miR-195-5p mimics 转染 BMSCs，再给予 CORM-3 诱导，细胞 Runx2 与 OPN 的表达以及矿化能力显著下降，差异有统计学意义（P < 0.05）。以 miR-195-5p inhibitor 转染 BMSCs，再给予 CORM-3 诱导，细胞的成骨分化能力显著增强，差异有统计学意义（P < 0.05）。以 Wnt3a 过表达载体转染 BMSCs，再给予 CORM-3 诱导，细胞的成骨分化能力显著增强，差异有统计学意义（P < 0.05）。以 Wnt3a siRNA 转染 BMSCs，再给予 CORM-3 诱导，细胞的成骨分化能力显著下降，差异有统计学意义（P < 0.05）。另外，由于 miR-195-5p 过表达而受到抑制的 BMSCs 成骨分化在 Wnt3a 过表达后得到改善与回升，同时结合双荧光素酶报告实验进一步证实了 miR-195-5p 与 Wnt3a 的靶向关系。
结论：CORM-3 通过 miR-195-5p/Wnt3a 信号通路促进大鼠 BMSCs 成骨分化，本研究为 CORM-3 应用于牙周病及其它骨缺损疾病的治疗提供了新的思路及理论基础。
Keywords: carbon monoxide-releasing molecule-3, microRNA-195-5p, Wnt3a, osteogenic differentiation, bone marrow mesenchymal stem cells