引言：自 2009 以来，耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）已经在中国东部沿海城市广泛传播。然而，CRKP 是如何在中国西南地区传播和演变的尚不清楚。
目的：通过收集 2010 年-2013 年云南昆明某医院的 41 株非重复来源的 CRKP，研究碳青霉烯酶基因的遗传特征和传播机制。
方法：利用 VITEK 2 compact 系统进行药物敏感性试验，基于多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析确定遗传关系，通过 DNA walking 和高通量测序揭示 bla_KPC-2 和 bla_NDM-1 的遗传背景。
结果：药敏结果显示，除替加环素外，所有分离株均对常用抗生素高度耐药。耐药基因方面，共鉴定出 34 株携带 bla_KPC-2 基因，3 株携带 bla_NDM-1 基因，1 株携带 bla_IMP-4 基因，3 株携带 bla_IMP-26 基因。分离株 KP67 的质粒 plasmid 1 同时携带 bla_NDM-1 和 bla_IMP-26 基因。通过 MLST 分析，41 个分离株属于 5 种 ST 型，分别为 ST11、ST290、ST340、ST395 和 ST437。令人惊讶的是 bla_KPC-2 基因只存在于 ST11 型分离株中。我们报道了携带 IS26 -△Tn3-ISKpn27 -bla_KPC-2-△ISKpn6 -korC-klcA -△repB -Tn1721 基因盒的包含 fosA3 基因的 IncR-IncF33: A -:B-多复制子质粒在所有 ST11 型分离株进行克隆传播。三个 bla_NDM-1 阳性的分离株属于三个不同的 ST 型，而它们的 bla_NDM-1 遗传背景也截然不同。有趣的是，在分离株 KP67 和 KP72 中，IS91 类元件通过转座将 bla_NDM-1 的侧翼区域以串联重复的形式复制成 1-5 个拷贝。分离株 KP82 的 bla_NDM-1 基因则位于一个普通的 IncX3 质粒上。
结论：本研究描述了云南携带 bla_KPC-2/bla_NDM-1 的 CRKP 的早期流行病学特征，并报道了 bla_NDM-1 基因簇的一种新的串联重复模式。这些发现补充了我们对碳青霉烯酶基因进化的认识。
关键词：耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌，克隆传播，遗传背景，IS91 转座子，bla_NDM-1 重复拷贝