目的：筛选联产 bla_NDM-5 和 bla_OXA-181 耐药基因的肠杆菌科细菌进行进一步的基因环境的初探。
方法：由于第一部分实验筛选到联产 bla_NDM-5 和 bla_OXA-181 耐药基因的肺炎克雷伯菌，因此继续收集某医院 2020 年 12 月至 2022 年 5 月的 CRE（Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae）菌株，通过 Kirby-Bauer 法和 Vitek 2 Compact 全自动细菌鉴定仪进行药敏实验；通过 PCR 结合 DNA 一代测序法检测碳青霉烯类耐药基因；通过 MLST 方法分析菌株的同源性。通过质粒接合实验研究联产 bla_NDM-5 和 bla_OXA-181 耐药基因的转移能力；通过 S1-PFGE 和 Southernblot 印迹，初步判断耐药质粒的大小；通过全基因组测序更加深入了解耐药基因的上下游环境。
结果：研究期间 3 株共同携带 bla_NDM-5 和 bla_OXA-181 耐药基因的肠杆菌科细菌首次被筛选出。MLST 结果表明：3 株联产 bla_NDM-5 和 bla_OXA-181 基因的肠杆菌科细菌分别为 ST2601，ST759，ST410 型。受体菌中携带 bla_NDM-5 和 bla_OXA-181 的基因均成功接合到供体菌 EC600 中。S1-PFGE、Southern blot 和全基因组测序结果显示 bla_NDM-5 和 bla_OXA-181 基因均位于 62kb 大小的 IncX3 型和 ColKP3 型质粒上。该质粒上还有喹诺酮类耐药基因：QnrS1；氨基糖苷类耐药基因：aadA2；磺胺类耐药基因：sul；甲氧卞氨嘧啶耐药基因：DfrA12 和季铵盐耐药基因：qacE△1 耐药基因。
Conclusion: This is the first report of Enterobacteriaceae strains that produce both NDM-5 and OXA-181 isolated from pediatric patients in China. Active infection control measures are urgently needed to prevent the spread of bacteria in children.
Keywords: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, NDM-5, OXA-181, plasmid